2020年口腔執(zhí)業(yè)醫(yī)師備考資料(口腔念珠菌病的診斷方法)
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1.涂片法:只能發(fā)現(xiàn)真菌而不能確定菌種,對(duì)于口腔黏膜干燥的患者陽(yáng)性率也較低。
(1)直接涂片:取口腔黏膜區(qū)假膜、脫落上皮等標(biāo)本,涂一薄層于載玻片上,滴入10%KOH溶液,微加熱以溶解角質(zhì)。光鏡觀察,可見折光性強(qiáng)的芽生孢子和假菌絲,從而在數(shù)分鐘內(nèi)提供念珠菌感染的證據(jù)。
(2)革蘭染色:用棉簽或竹片刮取損害組織后趁濕潤(rùn)時(shí)固定,常規(guī)革三染色呈陽(yáng)性。
(3)PAS染色:標(biāo)本干燥后用PAS染色,芽胞呈紅色,假菌絲較藍(lán),較便于觀察。
2.培養(yǎng)法:將標(biāo)本接種于沙氏培養(yǎng)基,經(jīng)3~4日后,形成乳白色圓形突起的菌落。若接種在玉米瓊脂培養(yǎng)基上,則菌落發(fā)育更旺盛,中心隆起。鏡檢若查見厚壁孢子,可確診為白色念珠菌。
(1)棉拭子法:用棉拭子在病損區(qū)取材。
(2)唾液培養(yǎng)法:收集非刺激性唾液1~2ml接種。
(3)含漱液濃縮法:取1ml滅菌磷酸鹽緩沖液充分含漱l分鐘,離心后棄上清,取1ml 接種。
(4)紙片法:應(yīng)用選擇性培養(yǎng)基與化學(xué)指示劑吸附于混合纖維素酯微孔濾膜印制的圓片,取刮片標(biāo)本接種其上,37℃培養(yǎng)24小時(shí),可出現(xiàn)棕黑色菌落。
3.免疫法:用間接免疫熒光法測(cè)定血清和非刺激性混合唾液的抗念珠菌熒光抗體。因存在較強(qiáng)的免疫交叉反應(yīng)性,故假陽(yáng)性率(誤檢率)較高。
4.活檢法:對(duì)于慢性或肥厚性損害可進(jìn)行活檢,將組織切片用PAS染色,鏡下可見增生的口腔黏膜上皮細(xì)胞間有芽生孢子和菌絲。
5.基因診斷:近年來(lái),分子水平的研究使得對(duì)念珠菌的認(rèn)識(shí)突破表型鑒定的局限,應(yīng)用基因分型方法對(duì)念珠菌進(jìn)行種間鑒別和種內(nèi)分型,為臨床診斷和流行病學(xué)研究提供了更能反映物種本質(zhì)的工具。
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