2014初級檢驗技士考試：免疫金的制備

　　免疫金的制備是醫(yī)學(xué)檢驗技士考試所涉及的內(nèi)容，環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學(xué)考試網(wǎng)整理如下，供廣大醫(yī)學(xué)檢驗技士考試考生參考學(xué)習(xí)。

　　1.用0.2mol/LK2CO3或0.1mol/LHC1調(diào)節(jié)膠體金溶液的pH至選定值。原則上可選擇待標記蛋白質(zhì)等電點，也可略為偏堿。但通常最適反應(yīng)pH往往需經(jīng)多次試驗才能確定。

　　在調(diào)節(jié)膠體金的pH值時應(yīng)注意，膠體金會阻塞pH計的電極，不可直接將電極插入膠體金溶液中，宜先用終濃度為0.15的聚乙二醇(PEG，20000)穩(wěn)定膠體金后，再膠體金的pH值。

　　2.將1/10體積的合適濃度的蛋白質(zhì)溶液加于膠體金溶液中，放置室溫反應(yīng)2～5min。

　　由于鹽類成分能影響膠體金對蛋白質(zhì)的吸附，并可使膠體金聚沉，因此待標記蛋白質(zhì)溶液若含有較高的離子濃度，應(yīng)在標記前先對低離子強度的蒸餾水透析去鹽。

　　3.加入濃度為0.2%的PEG或BSA以飽和游離的膠體金。

　　4.離心分離，去除上清液中未結(jié)合的蛋白質(zhì)。離心條件視膠體金顆粒的粒徑而異：對5nm金顆粒可選用40000r/min離心1h;8nm金顆粒用25000r/min離心45min;14nm金顆粒用25000r/min離心30min，40nm金顆粒用15000r/min離心30min.

　　5.輕吸上清液。沉淀用含PEG或BSA的緩沖液懸浮，恢復(fù)原體積后再離心。如此洗滌2～4次。以徹底除去未結(jié)合的蛋白質(zhì)。

　　6.免疫金復(fù)合物最終用稀釋液配制成工作濃度保存。稀釋液通常是加入穩(wěn)定劑的緩沖液。緩沖溶液常用中性的PBS或Tris緩沖液。

　　多種蛋白質(zhì)、葡聚糖、PEG2000、明膠等均為良好的高分子穩(wěn)定劑，PEG和BSA是最常用的穩(wěn)定劑。穩(wěn)定劑有兩大作用：一為保護膠體金的穩(wěn)定性，使之便于長期保存;二為防止或減少免疫金復(fù)合物的非特異性吸附反應(yīng)。穩(wěn)定劑的合理選擇是十分重要的，不適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑有時也會導(dǎo)致非特異性反應(yīng)。 分子量及蛋白質(zhì)濃度等也會影響蛋白質(zhì)的吸附。

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