2012檢驗技士免疫檢驗輔導:免疫組化(LP法)操作步驟
更新時間:2012-02-08 20:06:02
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1.切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復,可在此步后進行
2.緩沖液洗3min/2次。
3.為了降低內源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在Hydrogen Peroxide Block中孵育10-15分鐘。
4.緩沖液洗5min/2次。
5.滴加UltraVBlock,在室溫下孵育5分鐘以封閉非特異性的背景染色。
(注:孵育不要超過10分鐘,否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有5-10%正常羊血清,這一步可以省略。)
6.緩沖液洗5min/2次。
7.滴加一抗工作液37℃孵育1-2小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)
8.緩沖液洗5min/2次。
9.滴加Primary Antibody Enhancer(增強子),在室溫下孵育20分鐘。
10.緩沖液洗5min/2次。
11.滴加HRPPolymer(酶標二抗),在室溫下孵育30分鐘。
(注:HRPPolymer對光敏感,應避免不必要的光暴露并儲存在不透明的小瓶中。)
12.緩沖液洗5min/2次。
13.向1mlDAB Plus Substrate中滴加1-2滴DAB Plus Chromogen,混勻后滴加到切片上,孵育3-15分鐘。(具體時間由染色深淺決定。) 14.自來水充分沖洗,復染,脫水,透明,封片。
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更多信息查看:衛(wèi)生職稱輔導 臨床檢驗考試輔導
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