2012檢驗(yàn)技士免疫檢驗(yàn)輔導(dǎo)：免疫組化（LP法）操作步驟

　　1.切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復(fù)，可在此步后進(jìn)行

　　2.緩沖液洗3min/2次。

　　3.為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色，將切片放在Hydrogen Peroxide Block中孵育10-15分鐘。

　　4.緩沖液洗5min/2次。

　　5.滴加UltraVBlock，在室溫下孵育5分鐘以封閉非特異性的背景染色。

　　(注：孵育不要超過10分鐘，否則會(huì)導(dǎo)致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有5-10%正常羊血清，這一步可以省略。)

　　6.緩沖液洗5min/2次。

　　7.滴加一抗工作液37℃孵育1-2小時(shí)。(具體孵育時(shí)間和溫度由試驗(yàn)者最終決定)

　　8.緩沖液洗5min/2次。

　　9.滴加Primary Antibody Enhancer(增強(qiáng)子)，在室溫下孵育20分鐘。

　　10.緩沖液洗5min/2次。

　　11.滴加HRPPolymer(酶標(biāo)二抗)，在室溫下孵育30分鐘。

　　(注：HRPPolymer對(duì)光敏感，應(yīng)避免不必要的光暴露并儲(chǔ)存在不透明的小瓶中。)

　　12.緩沖液洗5min/2次。

　　13.向1mlDAB Plus Substrate中滴加1-2滴DAB Plus Chromogen，混勻后滴加到切片上，孵育3-15分鐘。(具體時(shí)間由染色深淺決定。) 14.自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明，封片。

2012年衛(wèi)生資格考試大綱匯總