初級(jí)檢驗(yàn)技士輔導(dǎo)：微生物學(xué)檢查(2)

　　初級(jí)檢驗(yàn)技士輔導(dǎo)：微生物學(xué)檢查(2)

　　檢驗(yàn)方法及鑒定：

　　1)直接鏡檢：無(wú)菌取膿汁、痰、滲出液和腦脊液(離心后取沉渣)涂片，經(jīng)革蘭染色后鏡檢。根據(jù)其形態(tài)、染色、初步診斷。

　　2)分離培養(yǎng)：血液標(biāo)本注入50ml葡萄糖肉湯或含硫酸鎂肉湯增菌培養(yǎng)，置35℃，24小時(shí)后開始觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，若均勻混濁，溶血及膠胨狀生長(zhǎng)，則接種于血瓊脂，進(jìn)一步鑒定，若無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，于48-72小時(shí)后觀察。血液標(biāo)本也可注入血培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。

　　膿汁、尿道滲出液、腦脊液離心沉淀物，可直接接種血瓊脂。35℃18-24小時(shí)培養(yǎng)，可見直徑2-3mm，產(chǎn)生不同色素的菌落。金黃色葡萄球菌在菌落周圍有透明的溶血環(huán)。

　　常用普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板、血瓊脂平板和高鹽甘露醇培養(yǎng)基，血培養(yǎng)用葡萄糖增菌培養(yǎng)基。

　　菌落特征、色素形成、形態(tài)染色、血漿凝固酶等，甘露醇發(fā)酵。

　　3)鑒定試驗(yàn)

　?、儆|酶試驗(yàn)：細(xì)菌產(chǎn)生的過(guò)氧化氫酶催化雙氧水生成水和氧氣，產(chǎn)生氣泡。

　　方法：取營(yíng)養(yǎng)瓊脂上的菌落置于潔凈試管內(nèi)或潔凈玻璃片上，滴加3%H2O2溶液數(shù)滴，觀察結(jié)果，如立即有大量氣泡產(chǎn)生為陽(yáng)性，不產(chǎn)生或氣泡量少為陰性。葡萄球菌屬為觸酶陽(yáng)性。

　　②血漿凝固酶：血漿凝固酶是金黃色葡萄球菌所產(chǎn)生的一種與其致病性有關(guān)的侵襲性酶，分為結(jié)合型和游離型兩種。其作用是使血漿中纖維蛋白在菌體表面沉積和凝固以阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬。

　　結(jié)合型：位于細(xì)胞壁上，能直接作用于血漿中纖維蛋白原，使之轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，環(huán)繞菌體形成凝塊。---玻片法檢測(cè)

　　游離型：產(chǎn)生后分泌到胞外，不能直接作用于血漿中纖維蛋白原，但可激活血漿凝血酶原，使之轉(zhuǎn)化為凝血酶，后者作用于纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，導(dǎo)致血漿凝固。---試管法檢測(cè)。

　　③甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)。

　?、苄律顾孛舾性囼?yàn)：凝固酶陰性的葡萄球菌的鑒別，采用該方法。一般新生霉素耐藥者多為腐生葡萄球菌，敏感者為表皮葡萄球菌。

　　⑤同時(shí)進(jìn)行體外藥物敏感試驗(yàn)：對(duì)苯唑西林的敏感試驗(yàn)是必須的，可將葡萄球菌分為苯唑西林敏感的葡萄球菌和苯唑西林耐藥的葡萄球菌。同時(shí)有必要測(cè)定β-內(nèi)酯胺酶及萬(wàn)古霉素的敏感性。

　　金黃色葡萄球菌：觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性、血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性、甘露醇試驗(yàn)陽(yáng)性、對(duì)新生霉素敏感。

　　表皮葡萄球菌：觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性、血漿凝固酶試驗(yàn)陰性、對(duì)新生霉素敏感。

　　腐生葡萄球菌：觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性、血漿凝固酶試驗(yàn)陰性、對(duì)新生霉素耐藥。

　　4)耐藥物性試驗(yàn)：檢測(cè)耐甲氧西林的金葡菌，耐甲氧西林的表葡菌，耐萬(wàn)古霉素的金黃色葡萄球菌，耐萬(wàn)古霉素的表皮葡萄球菌。

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