2014年自考生物制藥學重點知識問答:固定化酶反應的特性變化
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固定化酶反應的特性變化
(l)酶活力的改變:由于酶的空間構象發(fā)生改變或因載體的空間障礙,以及底物和產物進出載體的擴散阻力的影響,從而酶經固定化后活力通常比游離酶低,催化的專一性也可能改變。
(2)穩(wěn)定性提高:由于酶分子的基團與載體發(fā)生了多點連接,使酶蛋白質結構變得更穩(wěn)定,因而提高了對酸、堿、化學試劑和熱的穩(wěn)定性。
(3)最適作用溫度的改變:酶反應的最適溫度是酶催化反應速率與酶失活速率的綜合反映。酶經固定化后,穩(wěn)定性堤兩,失活速率降低,最后使最適酶反應溫度上升。
(4)最適pH的改變:因為固定化載體的基團所帶電荷隨之變化,加上載體疏水性的不同,因而使微環(huán)境下底物濃度與主體溶液中的濃度產生差異,最終使酶反應速率改變,因此使最適pH改變。
(5)反應動力學常數(shù)的改變:由于固定化酶分子局限于固定空間內,底物需通過外部和內部擴散進入載體內才能與酶分子復合催化,生成的產物同樣需通過內部和外部擴散回到液相主體,因而有擴散限制反應速率的問題。對應的米氏方程的Km和Vmax稱之為表觀值,這兩個值與游離酶的Km和Vmax是不相等的。
(6)相對酶活力與半衰期:經固定化操作往往使酶活力受損失,單位質量酶蛋白固定化酶與游離酶活力的比值就稱為相對酶活力;而固定化酶活力在催化過程其活力下降至初始活力的50%時所經過的時間被稱作半衰期。這兩個指標是衡量酶固定化工藝優(yōu)劣的最重要的技術和經濟指標。
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